高考生物復(fù)習(xí)：胡蘿卜的組織培養(yǎng)

　　一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>

　　胡蘿卜是細(xì)胞和組織培養(yǎng)中常用的經(jīng)典材料，是教學(xué)實(shí)驗(yàn)的良好材料。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)，要求學(xué)生熟悉胡蘿卜離體根培養(yǎng)的基本方法和步驟，掌握愈傷組織誘導(dǎo)的基本技能。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理：

　　植物體的莖，根，葉細(xì)胞一般都具有全能性，在一定條件的營(yíng)養(yǎng)和激素等條件下，

　　可以脫分化形成愈傷組織。將愈傷組織轉(zhuǎn) 接到含有不同激素成分的培養(yǎng)基上，就可以誘導(dǎo)其再分化生成胚狀體或叢芽，進(jìn)而發(fā)育成完整的小植株。植物組織培養(yǎng)的全過(guò)程，證明了分化的植物細(xì)胞，仍具有形成完整植株所需要的全部基因。

　　三、實(shí)驗(yàn)用具：超凈臺(tái) 解剖刀 刮皮刀 不銹鋼打孔器 培養(yǎng)皿 溫箱

　　四、方法步驟：

　　1. 將胡蘿卜用自來(lái)水沖洗干凈，用刮皮刀除去表皮1-2mm，橫切成大約10mm厚的切片。以下步驟均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。

　　2. 胡蘿卜片經(jīng)70%乙醇處理30秒鐘后，用無(wú)菌水沖洗一遍，再用、2%的次氯酸鈉溶液浸泡10分鐘，無(wú)菌水沖洗3~4次。

　　3. 將胡蘿卜片放入培養(yǎng)皿中，一手用鑷子固定胡蘿卜片，一手用打孔器垂直打孔，每個(gè)小孔打在靠近維管形成層的區(qū)域，務(wù)必打穿組織。然后從組織片中抽出打孔器，將胡蘿卜組織片收集在裝有無(wú)菌水的培養(yǎng)皿。重復(fù)打孔步驟，直至收集到足夠數(shù)量的組織圓片。

　　4. 用鑷子取出組織圓片，放入培養(yǎng)皿中，用刀片將組織圓片切成2mm長(zhǎng)的小塊，放入裝有無(wú)菌水的培養(yǎng)皿中。在整個(gè)操作過(guò)程中鑷子和解剖刀要多次火焰消毒，冷卻后再使用。

　　5、將胡蘿卜組織小塊放到滅過(guò)菌的濾紙上，吸干水分后接種到培養(yǎng)基表面。注意接種時(shí)培養(yǎng)瓶要有一定傾斜度，接種過(guò)程中鑷子不要直接在培養(yǎng)基上方完成，以減少污染機(jī)會(huì)。

　　6、將培養(yǎng)物一部分置于25。C溫箱中暗培養(yǎng)，另一部分到光照培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)，以比較光照和暗培養(yǎng)對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的反應(yīng)。